polyplus轉(zhuǎn)染試劑jetOPTIMUS®產(chǎn)品說(shuō)明書

更新時(shí)間：2023-06-29

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polyplus轉(zhuǎn)染試劑jetOPTIMUS®產(chǎn)品說(shuō)明書

本說(shuō)明書以DNA轉(zhuǎn)染為例進(jìn)行說(shuō)明：

第0天：細(xì)胞接種

→根據(jù)下表在V mL細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中接種細(xì)胞

培養(yǎng)皿	細(xì)胞數(shù)量	V=轉(zhuǎn)染過(guò)程中培養(yǎng)基的體積
96孔	7500 - 25000	0.125 mL
24孔	40000 - 100000	0.5 mL
12孔	80000 - 200000	1 mL
6孔/35mm	150000 - 400000	2 mL
60mm/25cm²燒瓶	200000 - 850000	5 mL
100mm/75cm²燒瓶	1 x 10⁶ - 4 x 10⁶	10 mL

*備注：對(duì)于特定的細(xì)胞類型或懸浮細(xì)胞，請(qǐng)參考完整的方案。

第1天：使用jetOPTIMUS®試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染

→僅使用jetOPTMUS®緩沖液

→以60-80%融合率轉(zhuǎn)染細(xì)胞

培養(yǎng)皿	W=jetOPTIMUS®緩沖液的體積	X=添加的DNA量	Y=jetOPTIMUS®體積
96孔	12.5 µL	0.13 µg	0.13-0.19 µL
24孔	50 µL	0.5 µg	0.5-0.75 µL
12孔	100 µl	1 µg	1-1.5 µL
6孔/35mm	200 µl	2 µg	2-3 µL
60mm/25cm²燒瓶	500 µl	4 µg	4-6 µL
100mm/75cm²燒瓶	1000 µl	10 µg	10-15 µL

第2-3天：測(cè)量基因表達(dá)

protocol優(yōu)化：

（1）測(cè)試不同的DNA量：X、0.5 X和1.5 X。

（2）測(cè)試不同的DNA/jetOPTIMUS®比例，1:1至1:1.5。

（3）有關(guān)細(xì)胞特異性協(xié)議，請(qǐng)聯(lián)系益元利康客服獲取。

培養(yǎng)皿	W=jetOPTIMUS®緩沖液的體積	X=添加的DNA量	Y=jetOPTIMUS®體積
96孔	12.5 µL	0.10-0.20 µg	0.10-0.30 µL
24孔	50 µL	0.25-0.75 µg	0.25-1 µL
12孔	100 µl	0.5-1.5 µg	0.5-2.25 µL
6孔/35mm	200 µl	1-3 µg	1-4.5 µL
60mm/25cm²燒瓶	500 µl	2-6 µg	2-9 µL
100mm/75cm²燒瓶	1000 µl	5-15 µg	5-22 µL

提高敏感細(xì)胞細(xì)胞活力的提示：

（1）轉(zhuǎn)染后4小時(shí)更換培養(yǎng)基。

（2）將DNA量減少到0.5倍，同時(shí)保持之前使用的DNA/jetOPTIMUS®比例。

（3）在較早的時(shí)間點(diǎn)（例如轉(zhuǎn)染后24小時(shí)而不是48小時(shí)）分析轉(zhuǎn)染。

（4）在敏感細(xì)胞的還原血清培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

（5）檢查靶基因是否影響細(xì)胞活力。

（6）確保細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前已傳代兩次以上且少于20次。

（7）丟棄過(guò)度培養(yǎng)的細(xì)胞。

良好的DNA轉(zhuǎn)染實(shí)踐：

（1）適當(dāng)儲(chǔ)存jetOPTIMUS®（5±3°C）。

（2）定期檢查支原體污染情況。

（3）使用報(bào)告基因來(lái)建立和優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。

（4）血清質(zhì)量可能嚴(yán)重影響轉(zhuǎn)染效率。購(gòu)買新一批血清時(shí)或胰蛋白酶檢查細(xì)胞活力以及轉(zhuǎn)染效率。

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生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等多個(gè)方向，專注于生命科學(xué)試劑、耗材、細(xì)胞、儀器等產(chǎn)品銷售，經(jīng)營(yíng)的品牌主要有：ThermoFisher、

Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam、polyplus等等。我們提供質(zhì)優(yōu)價(jià)美的產(chǎn)品、及時(shí)到位的服務(wù)，

努力成長(zhǎng)為生命科學(xué)和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商。