懸浮細(xì)胞如何進(jìn)行傳代培養(yǎng)？

懸浮細(xì)胞傳代是一項(xiàng)重要的實(shí)驗(yàn)操作,它可以幫助研究人員擴(kuò)增和維持細(xì)胞株。懸浮細(xì)胞如何進(jìn)行傳代呢？

一、懸浮細(xì)胞的傳代

懸浮細(xì)胞傳代比貼壁細(xì)胞傳代稍微簡(jiǎn)單一些。由于細(xì)胞已經(jīng)在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中懸浮，因此無需通過酶的作用使其從培養(yǎng)容器表面脫離，整個(gè)過程較為迅速，對(duì)細(xì)胞的損傷也較小。懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞的傳代培養(yǎng)要比貼壁細(xì)胞簡(jiǎn)單得多，通常有兩種方法。

1. 直接給帶傳代的培養(yǎng)瓶中補(bǔ)充一定量的新鮮.培養(yǎng)基，然后將進(jìn)行分裝。

2. 先通過離心棄掉營(yíng)養(yǎng)匱乏的舊培養(yǎng)基，然后再用適量的新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，最后將其分裝至培養(yǎng)瓶中即可。

懸浮細(xì)胞傳代后的延滯期一般比貼壁細(xì)胞短。

二、所需材料

★ 裝有懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)容器

★ 完quan生長(zhǎng)培養(yǎng)基，預(yù)熱至37%

★ 37°培養(yǎng)箱，充有二氧化碳濃度為5%的濕化空氣

三、懸浮細(xì)胞傳代流程

所有與細(xì)胞接觸的溶液和設(shè)備均應(yīng)為無菌狀態(tài)必須采用正確的無菌技術(shù)，并且在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。傳代應(yīng)在細(xì)胞處于對(duì)數(shù)期、未達(dá)到匯合狀態(tài)時(shí)進(jìn)行。達(dá)到匯合狀態(tài)時(shí)，懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞會(huì)聚集成團(tuán)塊，轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶時(shí)培養(yǎng)基會(huì)變得渾濁。傳代前所建議的最大細(xì)胞密度隨細(xì)胞系不同而有所差異;詳細(xì)信息請(qǐng)參閱針對(duì)具體細(xì)胞的立品說明書或操作手冊(cè)。

四、懸浮細(xì)胞的傳代方法

1、直接傳代法

①待懸浮細(xì)胞長(zhǎng)滿至80%-90%左右 (細(xì)胞懸液變黃)，即可傳代；

②用吸管吸棄細(xì)胞懸液1/2~ 2/3 ；

③加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。

2、離心傳代法

①將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)；

②150g離心5min，棄上清；

③使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞;

④吸管吸取適量細(xì)胞懸液，裝入新的培養(yǎng)瓶，再加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。

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