WB實(shí)驗(yàn)中條帶不跑歪的秘訣

在做 Western blot 實(shí)驗(yàn)時(shí)，你一定會(huì)遇到各式各樣的條帶，最常見(jiàn)的就是條帶跑歪了，如凹型條帶、凸型條帶、斜條帶、條帶拖尾等。如何更好的做好WB實(shí)驗(yàn)，讓我們一起來(lái)看看WB實(shí)驗(yàn)中條帶不跑歪的秘訣吧！

一、凹凸條帶的原因和解決辦法

可能原因：可能是由于膠未配好（凝膠未能wan全聚合，膠中有顆粒或氣泡，凝膠未冷卻好，），也可能是電壓過(guò)高。

解決方法：正確添加質(zhì)量合格且未過(guò)期的 AP 及 TEMED；過(guò)濾配膠的試劑保證配膠過(guò)程中膠內(nèi)無(wú)氣泡；凝膠冷卻好后再上樣；降低電壓。

二、條帶出現(xiàn)黑點(diǎn)或黑斑的原因和解決辦法

可能原因：試劑污染，抗體結(jié)合到封閉劑。

解決方法：使用新鮮配置的試劑；過(guò)濾封閉液；選用其他類(lèi)型封閉液。

三、條帶中出現(xiàn)邊緣規(guī)則的白圈的原因和解決辦法

可能原因：轉(zhuǎn)膜時(shí)膜和膠中間有氣泡，或抗體在膜上未均勻分散。

解決方法：制備轉(zhuǎn)膜凝膠時(shí)用玻棒趕去氣泡；使用搖床孵育抗體。

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