你知道PCR檢測技術的分類嗎？

分子診斷技術是指以DNA和RNA為診斷材料，用分子生物學技術通過檢測基因的存在、缺陷或表達異常，從而對人體狀態(tài)和疾病作出診斷的技術。其基本原理是檢測DNA或RNA的結構是否變化、量的多少及表達功能是否異常，以確定受檢者有無基因水平的異常變化，對疾病的預防、預測、診斷、治療具有重要意義。那么你知道PCR檢測技術的分類嗎？讓我們一起來看看吧！

PCR技術是一種用于擴增特定DNA片段的分子生物學技術，基本原理是在反應室中模擬細胞內的DNA復制，即人為創(chuàng)造核酸半保留復制條件，使目的DNA在細胞外完成擴增的過程。是體外DNA擴增技術之一，至今已經超過30年的歷史。

在1983年，美國人Mullis發(fā)明了聚合酶鏈反應技術(polymerase chain reaction, PCR),這一技術將DNA的變性原理以及復性原理加以利用，采用適溫延伸、高溫變性以及低溫復性，讓核酸片段實現了體外擴增，可將極微量的目標DNA特異地擴增上百萬倍，從而提高對DNA分子的分析和檢測，因為PCR有著很高的靈敏度以及特異性，而且簡便快速，所以這種技術已經成為目前臨床基因擴增實驗室接受程度最高的技術。同時，PCR技術又可以分為定量PCR和常規(guī)PCR，定量PCR分為實時熒光定量PCR（RT-PCR）和數字PCR。

一、普通PCR：

采用普通PCR 擴增儀來對靶基因進行擴增，然后采用瓊脂糖凝膠電泳對產物進行檢測，只能做定性分析。

二、熒光定量PCR（RT-PCR）：

熒光定量PCR（Real-Time PCR），也叫做qPCR，通過在反應體系中加入能夠指示反映進程的熒光探針，通過熒光信號的積累來監(jiān)測擴增產物的積累，通過熒光曲線來判斷結果，并可以借助Cq 值和標準曲線來定量。

qPCR 技術由于操作過程在封閉體系中進行，降低了污染概率，并且可以通過對熒光信號監(jiān)測從而進行定量檢測，因此臨床應用最為廣泛，已成為PCR中的主導技術。

實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為：TaqMan熒光探針、分子信標和熒光染料。

三、數字PCR(dPCR)：

數字PCR（DigitalPCR, dPCR, Dig-PCR）通過終點檢測計算目標序列的拷貝數，無需采用內參和標準曲線即可進行精確的絕對定量檢測。

數字PCR采用終點檢測，不依賴于Ct值（循環(huán)閾值），所以數字PCR反應受擴增效率的影響降低，對PCR反應抑制物的耐受能力提高，具有很高的準確度和重現性。

由于具備高靈敏度、高精確度的特點，不易被PCR反應抑制劑干擾，無需標準品可實現真正意義的絕對定量，而成為研究和應用熱點。

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