細(xì)胞消化的方法有哪些？

細(xì)胞消化的方法有哪些？

我們的細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)大部分會(huì)以貼壁的形式生長(zhǎng)，它們?cè)跈C(jī)體內(nèi)時(shí)，也是與其他細(xì)胞或者細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合的。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中使用的wan全培養(yǎng)基中的血清，含有許多帶陽(yáng)性電荷的促細(xì)胞附著因子(層黏連蛋白 Laminine、纖維連接蛋白 Fibronectin 等胞外基質(zhì)），能幫助細(xì)胞附著于帶陰性電荷的底物上，并形成連接、貼壁伸展。使細(xì)胞解除這種附著，就是細(xì)胞消化。那么你知道細(xì)胞消化的方法有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、機(jī)械消化法

直接用培養(yǎng)基吹打或使用細(xì)胞刮刀，通過(guò)外力使細(xì)胞解除貼壁狀態(tài)，一般用于不需要繼續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞，相較于其他方法，機(jī)械消化法無(wú)法量化控制，細(xì)胞分散效果差，且會(huì)造成大量細(xì)胞破損，影響細(xì)胞傳代狀態(tài)。

二、離子螯合法

細(xì)胞膜表面蛋白大多需要鈣、酶離子來(lái)維持與胞外基質(zhì)的穩(wěn)定鍵結(jié)，當(dāng)然也包含各種粘附蛋白（如：整合素、鈣黏著蛋白、橋粒等），螯合劑會(huì)在不破壞細(xì)胞膜表面蛋白的狀況下，抽離這些離子，使粘附蛋白失活而減少細(xì)胞-細(xì)胞間及細(xì)胞-底物間的連接作用，使細(xì)胞容易與培養(yǎng)底物分離。

0.02% EDTA是常用的離子螯合劑，在37℃效果最jia（消化敏感的細(xì)胞可在4℃作用），適用于消化一般貼壁性細(xì)胞或細(xì)胞表面標(biāo)記實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。

但EDTA無(wú)法用血清終止其反應(yīng)，所以在消化細(xì)胞后必須用緩沖鹽溶液（如：PBS）清洗離心，以免影響后續(xù)細(xì)胞貼壁效果。

三、酶消化法

用蛋白水解酶消化連接細(xì)胞及培養(yǎng)底物的蛋白質(zhì)，適用于消化貼壁性稍強(qiáng)的細(xì)胞。上述實(shí)驗(yàn)方法中最常見(jiàn)的還是胰酶消化。大部分細(xì)胞消化的時(shí)候是只要用胰酶潤(rùn)洗一遍即可，但是我們發(fā)現(xiàn)吸去胰蛋白酶后，殘留的那些附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2分鐘足夠消化細(xì)胞（絕大部分1分鐘不到）。對(duì)于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞，連續(xù)這樣傳代，對(duì)細(xì)胞傷害很大。簡(jiǎn)單的程序是先采用PBS潤(rùn)洗細(xì)胞吸去，胰酶潤(rùn)洗吸去，然后37℃消化細(xì)胞。

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