Wako之BAMBANKER® 無血清細胞凍存液(302-14681)凍存細胞的方法

細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。

BAMBANKER是一種含DMSO的無血清細胞凍存液，無不明動物源成分，高質(zhì)量標準為實驗效果帶來保證。不需要進行程序降溫，可在-80℃長期保存細胞（腫瘤細胞和常規(guī)細胞）。那么你知道BAMBANKER® 無血清細胞凍存液凍存細胞的方法嗎？讓我們一來看看吧！

一、凍存操作步驟

①從恒溫箱中取出培養(yǎng)中處于對數(shù)增殖期的細胞。

凍存對數(shù)增殖期的細胞，是可以確保細胞良好生存率中最重要的一點。

②使用部分細胞用臺盼藍染色并計數(shù)細胞數(shù)量。

③將培養(yǎng)液移至離心管中，在規(guī)定條件下進行離心。

④去除上清液后，將雜質(zhì)顆粒通過旋渦操作進行懸浮。

⑤每個凍存容器中細胞數(shù)要保持規(guī)定濃度，然后再添加凍存液。（每 1mL 凍存液可容納 5×10⁵-1×10⁷ 個細胞）

之后的操作步驟盡可能快速完成。另外，凍存液從冷藏柜取出后，盡快進行保存處理

⑥無需預冷細胞懸浮液，直接置于-80℃下保存。

若儲存在冷凍處理容器 bicell中，效果更佳。

⑦保存液氮時，先在-80℃保存 12 小時（超過一晚），待狀態(tài)穩(wěn)定后在移至液氮中保存。

轉(zhuǎn)移細胞時請盡快完成操作。

二、解凍操作步驟

①在 37℃恒溫箱（或者水浴鍋）等設(shè)備中解凍細胞，確認細胞液wan全融解。

此操作需迅速進行。因為細胞在解凍過程過極易受到損壞。

②將細胞液注入到 10mL 的清洗液（培養(yǎng)液）中，混合wan全后在規(guī)定條件下進行離心

（比如：300～400×ｇ；半徑 21cm 轉(zhuǎn)子 1200rpm）

③去除上清液后，將雜質(zhì)顆粒通過旋渦操作進行懸浮。

④加入培養(yǎng)液后混合wan全后，將其中一部分細胞用臺盼藍染色并計數(shù)細胞數(shù)量。

⑤將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)容器中，恒溫箱內(nèi)靜置培養(yǎng)。

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