百奧益康人腦組織通用解離試劑盒使用指南

百奧益康人腦組織通用解離試劑盒該怎么使用呢？快來收看本期內(nèi)容。

一、人腦組織通用解離試劑盒簡介

本產(chǎn)品適用于人腦組織的細(xì)胞懸液的分離制備,本產(chǎn)品利用酶溫和、快速有效地破壞細(xì)胞外基質(zhì)，釋放細(xì)胞，從而生成單細(xì)胞懸浮液。制備的單細(xì)胞懸液可用于單細(xì)胞測序、細(xì)胞培養(yǎng)或其他細(xì)胞相關(guān)檢測。

二、人腦組織通用解離試劑盒使用說明

【使用方法】

準(zhǔn)備工作:水浴鍋或雜交爐設(shè)置到37℃、配制含5%FBS的PBS新鮮組織約200mg(黃豆粒大小)，如圖1.

1.取一個5mL離心管，加入 2160μLBuferA,放入用 PBS 清洗干凈的組織樣本，并剪碎。

2.添加800μL的EnzymeB和10μ的Enzyme C，顛倒混勻。

3.放在 37℃水浴鍋或雜交爐中 20~30min。消化過程中,使用水浴鍋每隔3~5min 手動搖晃混勻，使用雜交爐轉(zhuǎn)速20~30轉(zhuǎn)/分鐘左右。

4.每隔3~5min質(zhì)檢一次細(xì)胞懸液，根據(jù)細(xì)胞總量及活性等確定消化停止時間5.消化完成后，用 70 μm 細(xì)胞篩進(jìn)行過濾，收集濾液于新的15 mL離心管中。6.加3mLRPMI1640培養(yǎng)基或5%FBS的 PBS 于消化的離心管中，上下顛倒涮洗管壁涮洗液同樣經(jīng)過同一個 70μm 細(xì)胞篩進(jìn)行過濾，收集濾液于第5步的15 mL 離心管中7.將收集液于4℃，300xg離心5min，棄上清

8.用5mL含5%FBS的PBS重懸沉淀，吹打混勻.

9.放入水平離心機(jī)，4℃，300xg離心5min，棄上清

10.用含5%FBS的 PBS 重懸沉淀至 2mL.

11.加入1mLDRS(細(xì)胞碎片去除緩沖液)，用5mL移液器緩慢吹打混勻10次。不要渦旋振蕩。

12.緩慢加入3mLPBS，輕輕覆蓋在最上層，千萬不要混勻，如圖2.

13.務(wù)必使用水平離心機(jī)，并設(shè)置為居中的加速度和減速度，4°℃，3000xg，離心 20 min

14.離心后，緩慢取出離心管。溶液分成3層。緩慢吸出全部上清液(優(yōu)先吸出碎片層)保留細(xì)胞沉淀(上清盡量去除干凈)，如圖3和圖4.注:離心管要輕拿輕放，確保分層明顯，不同層的溶液間不互相混合

15.向沉淀中加人適當(dāng)體積的含5%FBS的PBS,加人三倍體積的紅細(xì)胞裂解液(BA3311).

冰上裂紅5min。具體可以參考BA3311紅細(xì)胞裂解液說明書。

16.加入等體積的 PBS混勻，終止裂紅，4℃，450xg，離心5min，棄上清

17.用10mL含5%FBS的 PBS重懸沉淀，吹打混勻.

18.4℃，300xg離心5min，棄上清.

19.用50μL~2mL 含5%FBS的 PBS 重懸沉淀,根據(jù)所需的細(xì)胞濃度調(diào)整重懸液的體積。20.若有明顯細(xì)胞結(jié)團(tuán)，則使用 20μm細(xì)胞篩進(jìn)行過濾，收集濾液于新的離心管中。若無明顯細(xì)胞結(jié)團(tuán)，則可跳過此步驟.

21.用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對細(xì)胞懸液進(jìn)行質(zhì)控并記錄，質(zhì)控結(jié)束后請立即進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。