Omega PCR產物純化試劑盒D6492說明書

一、 試劑盒概述與原理

  產品名稱： E.Z.N.A.® Cycle-Pure Kit

  貨號： D6492

  用途： 用于快速純化PCR、酶切、標記等反應后的DNA產物，去除引物、引物二聚體、dNTPs、鹽離子、酶等雜質。

  原理： 基于 硅膠柱（HiBind® DNA Mini Column） 技術。在高鹽條件下，DNA會特異性地吸附到硅膠膜上，而雜質則被洗脫。隨后在低鹽緩沖液中將純凈的DNA洗脫下來。

  特點：

      快速： 整個過程可在15-20分鐘內完成。

      高效： 對100bp至10kb的DNA片段回收率高。

      高純度： 純化后的DNA可直接用于測序、克隆、酶切、連接等下游實驗。

二、 試劑盒組成（以D6492-01為例，100次預裝）

請在使用前核對以下試劑是否齊全且充足：

1.  CP Buffer： 結合緩沖液（含高濃度離液鹽）。

2.  DNA Wash Buffer（濃縮液）： 漂洗液，使用前必須按說明書要求加入無水乙醇進行稀釋（通常是在整瓶中加入指定體積的無水乙醇）。

3.  Elution Buffer： 洗脫液（10 mM Tris-HCl， pH 8.5）。也可使用無菌去離子水（pH > 7.0）代替，但用Elution Buffer洗脫效率通常更高。

4.  HiBind® DNA Mini Columns： 吸附柱（2 mL）及收集管（2 mL）。

5.  說明書。

三、 標準操作流程

實驗前準備：

  將DNA Wash Buffer按說明書要求用無水乙醇稀釋。

  將CP Buffer和Elution Buffer置于室溫融化。

  準備好無水乙醇。

第一步：平衡結合條件

1.  向您的PCR反應液中加入5倍體積的CP Buffer（例如，50μL PCR產物 + 250μL CP Buffer）。

2.  用移液器充分吹打混勻。

第二步：DNA結合

1.  將混合物全部轉移到HiBind® DNA Mini Column中（柱子裝在2mL收集管內）。

2.  室溫（15-25°C），≥10,000 x g 離心 30-60秒。

3.  棄去收集管中的濾液，將柱子放回同一收集管中。

第三步：漂洗

1.  向柱子中加入 700μL DNA Wash Buffer（已含乙醇?。?/span>

2.  室溫，≥10,000 x g 離心 30-60秒。

3.  棄濾液，將柱子放回收集管。

4.  重復步驟1-3一次（即總共用Wash Buffer漂洗兩次）。

5.  空離以cedi去除殘留乙醇： 將空柱以最大轉速（≥13,000 x g）離心 2分鐘。這一步至關重要，因為殘留的乙醇會嚴重影響下游酶促反應。

第四步：洗脫DNA

1.  將柱子轉移到一個新的、干凈的 1.5mL 離心管中。

2.  向柱子硅膠膜的正中央，懸空滴加 15-30μL Elution Buffer（或無菌水）。

3.  室溫靜置 2-5分鐘，使緩沖液充分浸潤膜。

4.  室溫，≥10,000 x g 離心 1分鐘。離心管底部的液體即為您純化后的DNA。

5.  （可選，用于提高得率） 將離心得到的洗脫液重新加回柱子吸附膜中央，再次離心1分鐘。

四、 關鍵要點與經驗總結

1.  比例是關鍵： “PCR產物：CP Buffer = 1：5" 這個比例必須遵守。這是保證DNA高效結合到柱上的前提。如果產物體積很小，可以先用無菌水補足到一定體積（如50μL）再加CP Buffer。

2.  乙醇是必須的： 使用前務必確認 DNA Wash Buffer 已加入正確量的無水乙醇。未加乙醇的Wash Buffer無法有效去除鹽分。

3.  cedi去除乙醇： 最后的 “空離2分鐘" 步驟絕對不能省略。殘留的乙醇會抑制后續的酶（如連接酶、測序酶等）活性。離心后可以打開柱子蓋，在室溫下再放置幾分鐘讓殘余乙醇wanquan揮發。

4.  提高洗脫效率：

      預熱Elution Buffer： 將洗脫液預熱至65°C或更高溫度，可以顯著提高DNA的洗脫效率，從而提高最終得率。

      洗脫體積： 洗脫體積越小，濃度越高，但總得率可能會略有下降。根據下游應用需求平衡。對于測序，通常用15-20μL洗脫；對于需要高濃度DNA的應用，可以嘗試用10μL洗脫。

5.  關于DNA片段大小： 該試劑盒適用于100bp - 10kb的片段。對于非常小的片段（如<100bp的引物二聚體），在高鹽條件下結合效率較低，因此可以被有效去除。對于非常大的片段（>10kb），結合和洗脫效率會下降，需酌情增加結合和洗脫時間。

五、 下游應用

純化后的DNA適用于：

  Sanger測序

  限制性內切酶消化

  連接與克隆

  體外轉錄/翻譯

  下一代測序（NGS）文庫構建等。

六、常見問題排查

Omega代理——天津益元利康生物科技有限公司

天津益元利康生物科技有限公司是一家專注于生命科學的科技企業，由在國內科研試劑領域有著豐富從業經驗的技術團隊和管理團隊組建而成，專營進口生物試劑，科學儀器，實驗消耗品，化工原料及藥物中間體等。公司與諸多國外品牌簽下代理，RD、Abcam、CST、Genetex、Biolegend、ebioscience、polypure、polyplus、Bethyl、Novus等，能為廣大科研用戶提供數萬種試劑、儀器和實驗消耗品。
公司將不斷把國際上優質的產品引入國內市場，滿足客戶的需求，公司也將緊跟生命科學的發展，為廣大科研工作者探索生命科學的奧秘奉獻綿薄之力！