細胞轉(zhuǎn)染的影響因素

　　細胞轉(zhuǎn)染的影響因素
 

　　做轉(zhuǎn)染實驗時，除了選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑，還需要對轉(zhuǎn)染條件進行優(yōu)化，以便獲得轉(zhuǎn)染效果。那么你知道影響細胞轉(zhuǎn)染的因素有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！
 

　　一、細胞狀態(tài)
 

　　細胞狀態(tài)不好，會導致轉(zhuǎn)染效率低下，因此，轉(zhuǎn)染前要求良好的細胞狀態(tài)和細胞活性。轉(zhuǎn)染時細胞密度以70~90%(貼壁細胞)或2×106~4×106細胞/mL(懸浮細胞)為宜，一般不建議用生長幾天或傳代次數(shù)少的細胞做轉(zhuǎn)染，細胞密度過高會嚴重影響細胞狀態(tài)(周期進程阻滯，凋亡增加等)，細胞密度過低可能會導致生長異常或者由于轉(zhuǎn)染試劑對細胞的毒性導致細胞死亡。
 

　　二、質(zhì)粒
 

　　為實現(xiàn)高效率、低毒性的轉(zhuǎn)染，應使用高質(zhì)量的質(zhì)粒，結(jié)構(gòu)完整，純度高，無污染，無菌，無內(nèi)毒素。如果質(zhì)粒不純，帶少量鹽離子，蛋白、代謝物污染等都會顯著影響轉(zhuǎn)染復合物的有效形成；而含有內(nèi)毒素的質(zhì)粒對細胞存在很大的毒性作用。另外抗生素一般對真核細胞無毒，但轉(zhuǎn)染過程中細胞通透性增加，使抗生素進入細胞，從而降低細胞活性，導致轉(zhuǎn)染效率低下。
 

　　三、載體構(gòu)建
 

　　若質(zhì)粒基因產(chǎn)物對細胞有毒害作用，則轉(zhuǎn)染難以成功。轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建選擇可調(diào)控，強度適合的啟動子很重要，可以用空載體或相同載體的其他基因作為對照排除毒性對細胞的影響。
 

　　四、轉(zhuǎn)染試劑和DNA的比例
 

　　許多轉(zhuǎn)染方法都需要優(yōu)化轉(zhuǎn)染試劑和DNA的比例。不同細胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，細胞系的選擇通常根據(jù)實驗需要確定，轉(zhuǎn)染試劑也應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇合適的，然后進行預實驗，選擇合適濃度的DNA，調(diào)整DNA與轉(zhuǎn)染試劑的比例，以獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。
 

　　五、轉(zhuǎn)染后篩選時間
 

　　轉(zhuǎn)染后篩選不能太早或太晚，因為轉(zhuǎn)染了外源基因的細胞代謝負荷大，增殖較慢，太晚可能會被沒有外源基因轉(zhuǎn)入的細胞淹沒，導致篩選不出陽性克隆。因此一般是在轉(zhuǎn)染48h之后開始加抗生素篩選。
 

　　六、污染
 

　　細胞污染會造成轉(zhuǎn)染效率低下，為防止細胞污染應注意避免培養(yǎng)物被細菌、真菌、病毒、支原體或其他細胞種類等污染；避免培養(yǎng)的細胞被支原體污染，必要時進行支原體污染的常規(guī)篩查；避免與實驗室同時培養(yǎng)的其他種類細胞發(fā)生交叉污染。
 

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