影響免疫熒光（IF）實驗結(jié)果的因素有哪些？

免疫熒光染色技術(shù)是一種以免疫學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合生物化學(xué)技術(shù)和顯微技術(shù)發(fā)展而來的蛋白等分子檢測技術(shù)。那么你知道影響免疫熒光（IF）實驗結(jié)果的因素有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！

一、免疫熒光染色方法的選擇

免疫熒光染色技術(shù)分為直接法和間接法。

直接法：將熒光標(biāo)記物偶聯(lián)在抗原/抗體上，直接與相應(yīng)的抗體/抗原反應(yīng)。

間接法：先用未標(biāo)記的一抗與抗原充分反應(yīng)后，再利用熒光標(biāo)記的二抗與已經(jīng)結(jié)合在抗原上的一抗結(jié)合，達(dá)到檢測抗原的目的。

二、抗體的選擇

與目標(biāo)蛋白直接結(jié)合的一抗，在條件允許的條件下，盡量選擇相同來源的免疫原或者選擇已驗證種屬反應(yīng)性的抗體。

如果進(jìn)行不同目標(biāo)蛋白的雙染或多染時，這些不同蛋白所對應(yīng)的一抗應(yīng)該來源于不同宿主。

單克隆抗體與多克隆抗體、種屬免疫原、反應(yīng)性和抗體的宿主來源是抗體選擇最主要考慮的因素，其直接決定著免疫熒光染色的背景、特異性和成敗。熒光偶聯(lián)的二抗應(yīng)選擇與一抗相對應(yīng)的抗體，及抗一抗的二抗。

三、抗體保存

防止熒光抗體失活、污染以及熒光染料的脫落和淬滅。

在抗體保存過程中，適量分裝，避免反復(fù)凍融。

蛋白極易被塑料等吸附，如果用塑料管分裝，抗體中應(yīng)添加BSA等。

為防止污染也可以添加0.01%的硫柳汞或者0.1%的die氮化鈉。

為防止淬滅，保存熒光抗體時應(yīng)該注意避光，可以利用錫箔紙包好，或者放在避光的容器中。

四、培養(yǎng)載體的選擇

根據(jù)貼壁情況，細(xì)胞可分為貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。

貼壁細(xì)胞一般常用24孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，接種細(xì)胞前放置0.17mm玻璃細(xì)胞爬片。

懸浮細(xì)胞常用6孔板培養(yǎng)，免疫熒光染色處理后，取少量加在0.17mm玻璃細(xì)胞爬片上。

最后將細(xì)胞爬片倒扣到載玻片上，封片，放4℃保存。

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